Principe général de l’imagerie intravitale multi-photonique

Nos deux systèmes d’imagerie sont composés d’un microscope accolé à une loupe binoculaire permettant ainsi de faire une dissection sous anesthésie gazeuse puis d’imager le tissu en microscopie multi-photonique.
Ils permettent une imagerie intégrative haute résolution (<1µm) chez le petit animal anesthésié.

L’utilisation d’objectifs à très grande distance de travail permet une imagerie en profondeur dans l’animal et la mise en place d’un système de perfusion indispensable au maintien de l’intégrité des tissus et de micromanipulateurs (injections, mesures d’activités électriques,…) à la surface du tissu d’intérêt (image à épi-fluorescence).

L’excitation 2-photon dans l’infrarouge permet une forte pénétrance dans les tissus (jusqu’à plusieurs centaines de µm de profondeur dans les tissus les moins denses).

Avantages

• Excitation point focal
• Faible photo blanchiment
• Résolution confocale
• Infrarouges peu énergétiques
• Faible toxicité
• Grande pénétrance dans les tissus

Domaines d’applications

L’acquisition de signaux fluorescents sur nos systèmes d’imagerie permet en particulier de travailler en dynamique (activité calcique, suivi de molécules, suivi de cellules,…) avec une résolution confocale (cinétiques de diffusion,…) et à haute fréquence.

L’un des deux systèmes est configuré avec deux lasers infrarouges collimatés et de longueur d’onde accordable permettant un large spectre de protocoles et d’expériences d’optogénétique : *Photo-stimulation, Photo-ablation, libération de molécules cagées photolabiles, etc*.

Il est également possible de réaliser de l’imagerie de tissus transparisés grâce à la disponibilité d’objectifs spécialement conçus pour ce type d’imagerie.
Ces systèmes d’imagerie sont également adaptés à l’imagerie in vitro (cuve thermostatée) sur tranches de tissu frais.